بررسی میزان ترکیبات فنلی کل با بهره گرفتن از Folin-Ciocalteu و بر طبق روشKim و همکاران به صورت زیر انجام گرفت ( Kim et al. 2007):
۳-۱۲-۱- مواد و محلول های مورد نیاز
در این آزمایش از عصاره های متانولی برگ گیاهان، متانول ۱۰۰ درصد ، متانول ۵۰ درصد، معرف Folin-Ciocalteu، بی­کربنات سدیم ۶ درصد و محلول استاندارد گالیک اسید استفاده گردید.
۳-۱۲-۲- روش آزمایش
به منظور اندازه گیری میزان ترکیبات فنلی­کل در عصاره های متانولی گیاهان، از معرف رقیق شده Folin-Ciocalteu استفاده گردید. بدین صورت که درون یک ظرف فویل پیچ شده ۵ میلی لیتر معرف Folin-Ciocalteu ریخته و ۴۵ میلی لیتر آب مقطر به آن اضافه گردید. در نتیجه معرف Folin-Ciocalteu ده بار رقیق تر شد. این محلول تا زمان استفاده در یخچال نگاه داری شد. ۲۰۰ میکرو لیتر از غلظت های مختلف عصاره متانولی گیاهان که بسته به نوع گیاه بین یک تا ۳۰ میلی گرم در میلی لیتر بودند به لوله های آزمایش محتوی ۱۵۰۰ میکرو لیتر معرف رقیق Folin-Ciocalteu اضافه گردیدند و نمونه ها به مدت ۵ دقیقه در دمای محیط قرار گرفتند. سپس ۱۵۰۰ میکرو لیتر محلول ۶ درصد (v:w) بی کربنات سدیم، که از طریق حل نمودن شش گرم بی کربنات سدیم در ۱۰۰ میلی لیتر آب مقطر تهیه شده بود، به لوله های آزمایش اضافه گردید. نمونه ها به مدت ۱۳۰ دقیقه در دمای اتاق قرار داده شدند. محلول شاهد (کنترل) فاقد عصاره و محتوی ۲۰۰ میکرو لیتر متانول، ۱۵۰۰ میکرو لیتر معرفFolin-Ciocalteu و ۱۵۰۰ میکرولیتر محلول بی کربنات سدیم بودند. جذب دستگاه توسط محلول شاهد (کنترل) در طول موج nm750 صفر گردید و پس از آن جذب سایر نمونه ها در طول موج مذکور قرائت شد.
۳-۱۲-۳- تهیه محلول استاندارد
برای تهیه محلول استاندارد گالیک اسید، ۰۰۲/۰ گرم گالیک اسید در ۱۰ میلی لیتر متانول ۵۰ درصد حل گردید و بدین ترتیب محلول استاک ۲۰۰ میکروگرم در میلی لیتر گالیک اسید تهیه شد. سپس غلظت های ۲۵، ۵۰، ۷۵، ۱۰۰، ۱۲۵، ۱۵۰ و ۲۰۰ میکروگرم در میلی لیتر گالیک اسید از محلول استاک تهیه گردید و از هر یک ۲۰۰ میکرو لیتر به لوله های آزمایش محتوی ۱۵۰۰ میکرولیتر معرف رقیق Folin-Ciocalteu اضافه گردید. نمونه ها به مدت ۵ دقیقه در دمای محیط قرار گرفتند و پس از آن ۱۵۰۰ میکرو لیتر محلول ۶ درصد بی کربنات سدیم به هر لوله آزمایش اضافه گردید. نمونه ها به مدت ۱۳۰ دقیقه در دمای اتاق قرار داده شدند.

محلول شاهد (کنترل) فاقد محلول گالیک اسید و محتوی ۲۰۰ میکرولیتر متانول، ۱۵۰۰ میکرولیتر معرف Folin-Ciocalteu و ۱۵۰۰ میکرولیتر محلول بی کربنات سدیم بودند که توسط آن جذب دستگاه اسپکتروفتومتر در طول موج nm750 صفر گردید پس از آن جذب محلول های استاندارد در طول موج مذکور قرائت شد. از مقادیر جذب به دست آمده برای رسم منحنی استاندارد استفاده گردید و سپس با بهره گرفتن از منحنی استاندارد میزان ترکیبات فنلی کل موجود در نمونه های گیاهی بر حسب میلی گرم گالیک اسید بر گرم وزن خشک محاسبه گردید. تمامی آزمایشات در سه تکرار انجام پذیرفت.
۳-۱۳-آزمایش اثر بستر کشت بر پتانسیل آنتی اکسیدانی بااستفاده از روش DPPH
تعیین پتانسیل آنتی اکسیدانی با بهره گرفتن از رادیکال پایدار DPPH بر طبق روش توصیف شده توسط Shimada و همکاران به صورت زیر انجام پذیرفت (Shimada et al., 1992 ) :
۳-۱۳-۱- مواد و محلول های مورد نیاز
در این آزمایش از عصاره متانولی نمونه های گیاهی، متانول ۱۰۰ درصد، محلول ۰۰۴/۰ درصد DPPH در متانول و محلول Trolox استفاده گردید.
۳-۱۳-۲- روش آزمایش
به منظور اندازه گیری پتانسیل آنتی اکسیدانی عصاره­های متانولی از محلول ۰۰۴/۰ درصد DPPH در متانول استفاده گردید. ابتدا محلول استاک ((stock solution تهیه گردید بدین صورت که ۰۲۴/۰ گرمDPPH را در یک ارلن فویل پیچ شده ریخته و سپس توسط ۱۰۰ میلی لیتر متانول ۱۰۰ درصد حل گردید. این محلول تا زمان استفاده در دمای  نگاه داری شد. برای تهیه محلول ۰۰۴/۰ درصد DPPH در متانول، ۱۰ میلی لیتر از محلول فوق را در یک ارلن ریخته و ۴۵ میلی لیتر متانول ۱۰۰ درصد به آن اضافه گردید. محدوده جذب این محلول در طول موج nm515 می­بایست ۰۲/۰ ± ۱/۱ باشد. سپس ۱۵۰ میکرولیتر از غلظت های مختلف عصاره های متانولی گیاه که بسته به نوع گیاه بین ۱ تا ۳۰ میلی گرم در میلی لیتر بودند به ۲۸۵۰ میکرو لیتر محلول ۰۰۴/۰ درصد DPPH در متانول اضافه گردید و به مدت یک ساعت در تاریکی قرار داده شدند. محلول شاهد (کنترل) فاقد عصاره و محتوی ۱۵۰ میکرولیتر متانول و ۲۸۵۰ میکرولیتر محلول ۰۰۴/۰ درصد DPPH در متانول بود. دستگاه اسپکتروفتومتر توسط متانول در طول موج nm515 صفر گردید و پس از آن جذب شاهد و نمونه­ها در طول موج مذکور قرائت شد.
۳-۱۳-۳- تهیه محلول استاندارد
برای تعیین پتانسیل آنتی اکسیدانی لازم است منحنی استاندارد رسم گردد. برای این منظور از ترولکس (Trolox) که یک آنتی­اکسیدان سنتزی و دارای ساختمانی شبیه به ویتامین E می­باشد استفاده گردید. ابتدا محلول استاک (stock solution) ترولکس در متانول و سپس با بهره گرفتن از متانول خالص غلظت های ۲۵، ۵۰، ۱۰۰، ۲۰۰، ۳۰۰، ۴۰۰، ۵۰۰، ۶۰۰، ۷۰۰ و ۸۰۰ میکرو مولار ترولکس تهیه گردید. آنگاه ۱۵۰ میکرو لیتر از غلظت های تهیه شده به ۲۸۵۰ میکرولیتر محلول ۰۰۴/۰ درصد DPPH در متانول اضافه گردید.
محلول­ها به مدت یک ساعت در تاریکی قرار گرفتند و پس از صفر کردن دستگاه اسپکتروفتومتر توسط متانول خالص در طول موج nm515، جذب محلول­های استاندارد در این طول موج قرائت شد و با بهره گرفتن از مقادیر جذب بدست آمده، منحنی استاندارد رسم گردید.
با بهره گرفتن از منحنی استاندارد پتانسیل آنتی اکسیدانی گیاهان معادل ترولکس بر حسب میکرومول ترولکس بازاء گرم وزن خشک تعیین گردید. هم چنین درصد مهار رادیکال های DPPHتوسط نمونه گیاهان با بهره گرفتن از فرمول زیر تعیین گردید. در این معادله A_blank میزان جذب کنترل و A_sample میزان جذب نمونه است.
% inhibition = (A_blank – A_sample) / A_blank × ۱۰۰
به منظور تعیین غلظتی از عصاره متانولی برگ گیاهان که ۵۰ درصد رادیکال های DPPH را مهار می کند (IC₅₀)، از نمودارهای مربوط به جذب محلول DPPH در غلظت های مختلف عصاره متانولی هر نمونه گیاهی استفاده گردید. تمامی آزمایشات در سه تکرار انجام پذیرفت.
۳-۱۴-بررسی خاصیت ضد میکروبی اندام هوایی کاکتوس برزی­کاکتوس طی روش­های متفاوت
۳-۱۴-۱-فهرست وسایل مورد استفاده شده برای کار میکروبی
انکوباتور
اتوکلاو
آسیاب
کلونجر
ترازو
پلیت های با اندازه های متفاوت
سواپ
دیسک های ۶٫۴ میلی متری
انس
پنس
لوپ
لوله آزمایش
رک ( جا لوله­ای)
کاردک
شیکر
یخچال
سمپلر
سر سمپلر
هود معمولی
هود UV دار
سانتریفیوژ
ارلن، بشر، استوانه مدرج، جالوله­ای، لوله فالکون، کاغذ صافی
فیلترهای تزریق