این آلکالوئید گیاهی ایزوکویینولین دارای اثرات درمانی مختلفی میباشد از جمله اثرات ضد باکتری، ضد عفونت و همچنین سبب تحریک بخشهایی از سیستم ایمنی بدن و مهار انقباضات ماهیچه صاف روده ای و … می شود ]۲۹ .[
بربرین و مشتقات آن برای درمان تومور، سرطان، بیماری قلبی عروقی، آسیب ایسکمی مغزی، بیماریهای روانی، آلزایمر، پوکی استخوان، هایپرلیپمی، سیروز کبدی و همچنین در درمان دیابت با کاهش گلوکز خون موثر است ]۳۰ .[اثرات ضد فشار خون، ضد تجمع پلاکت، آنتی اکسیدانی، مبارزه علیه استرس اکسیداتیو در آسیب کلیوی، کاهش کلسترول از دیگر اثرات درمانی بربرین میباشد ]۸٫[
۱-۶-۲- اثرات بربرین بر روی بیضه
در تحقیقات قبل مشاهده شد که بربرین در دوزهای بالا باعث بیتحرکی اسپرم ]۹ [و همچنین باعث اختلال در مسیر سنتز هورمونهای جنسی از جمله تستوسترون با افزایش در بیان آنزیمCYP17 (آنزیم سازنده استروئید از خانواده ژن سیتوکروم P-450 مونواکسیداز) و ۳-بتا هیدروکسی استروئید هیدروژناز (HSD-β۳) که در تبدیل پرگنهنولون به تستوسترون در سلولهای لایدیگ نقش دارند، میشوند] ۲۵ .[
بربرین با کاهش بیان مولکولهای پیش التهابی از جمله TNF-α، IL-1 و COX2 و …اثرات ضد التهابی خود را بروز میدهد. بربرین اثر مهاری بر لیپواکسیژنازها و گزانتین اکسیداز که دو منبع برای تولید ROS هستند، اثر حفاظتی بر علیه استرس شبکه آندوپلاسمی و میتوکندری و تغییرات مورفولوژیکی آپوپتوز ناشی از ایسکمی، مهار سنتز DNA در لنفوسیتها، مهار بیان COX2 و کاهش تولید PGE2 و مهار اتصال پروتئین اکتیویتور۱ (AP-1) دارد ]۲۶ .[
کاهش مالونیل دی آلدهید (MDA) و افزایش فعالیت سوپراکسید دسموتاز (SOD)، به عنوان دو مارکر زیستی استرس اکسیداتیو، کاهش و به سطح نرمال رساندن کاسپاز ۳ (مارکر آپوپتوزی) که در هیپوکسی افزایش یافته و باعث افزایش calpain و آسیب توبول پروگزیمال می شود از دیگر اثرات ضد استرس اکسیداتیو بربرین میباشد ]۳۱،۳۲،۳۳ .[
۱-۶-۳- اثرات بربرین بر روی کلیه
بربرین (µg/ml20-5) همانند هیدروکلروتیازید[۱۲] در موش صحرایی نژاد ویستار برون ده ادراری را همراه با افزایش PH، افزایش دفع سدیم و پتاسیم و کاهش دفع کلسیم، افزایش میدهد.
در موشهای صحرایی نر نژاد ویستار اضافه کردن اتیلن گلیکول [۱۳]در آب آشامیدنی و بربرین (mg/kg10) مانع رسوب کریستال اگزالات کلسیم در توبولهای کلیه می شود و از اثرات زیان بار سنگ زایی شامل کاهش وزن، اختلال و آسیب عملکرد کلیه، استرس اکسیداتیو و کاهش فعالیت آنزیم های آنتی اکسیدان جلوگیری می کند] ۱۱ .[
بربرین با توانایی کاهش قند خون و پیشگیری و بهبود استرس اکسیداتیو و اثرات درمانی بر نارسایی حاد کلیوی در بهبود آسیبهای بیضه ای ناشی از این بیماری نیز موثر است.
۱-۷-هدف
نارسایی حاد کلیوی با اختلال در محور هیپوتالاموس - هیپوفیز - بیضه همراه است. از طرفی اثرات آنتی اکسیدانی و ضد التهابی بربرین به اثبات رسیده است. از آنجا که نارسایی حاد کلیوی با استرس اکسیداتیو و التهاب همراه است، و در رابطه با اثرات بربرین بر اختلالات عملکردی و بافتی بیضه ای ناشی از نارسایی حاد کلیوی تا کنون نتیجهای منتشر نشده است، هدف از این تحقیق این است که آسیبهای عملکردی و بافتی بیضهای القاء شده توسط ایسکمی ریپرفیوژن کلیه بررسی شده و اثرات بربرین بر آنها مشخص گردد.
فصل دوم
مواد و روشها
این تحقیق بر روی ۲۸ سر موش صحرایی نر از نژاد ویستار با محدوده وزنی ۲۶۰ تا ۳۰۰ گرم که در شروع آزمایش در شرایط Cͦ ۲ ± ۲۲ درجه سانتی گراد و سیکل روشنایی- خاموشی ۱۲ ساعت (هفت صبح تا هفت شب روشن و هفت شب تا هفت صبح تاریک) نگهداری میشدند، صورت پذیرفت. به جز در هنگام آزمایش، آب و غذا به صورت آزاد در اختیار آنها قرار میگرفت. چهار گروه از موشهای صحرایی (۷=n ) مورد آزمایش قرار گرفتند:
۲-۱- مواد مورد نیاز
-
- موش صحرایی نر بالغ نژاد ویستار
-
- بربرین هیدروکلراید
-
- کتامین و زیلازین
-
- نرمال سیلین
-
- هپارین
-
- پنی سیلین و استرپتومایسین
-
- آب مقطر
-
- دکونکس
-
- پنبه و گاز
۲–۲- وسایل مورد نیاز
-
- میز جراحی
-
- استریو میکروسکوپ جراحی
-
- وسایل جراحی ظریف (انواع قیچی از جمله قیچی راست چشمی، پنسهای نوک تیز، کوچک و بزرگ)
-
- ترازو
-
- میکروپیپت
-
- سر سمپلر
-
- اپندروف
-
- سرنگ خونگیری
-
- سرنگ گاواژ
-
- سوزن و نخ بخیه
-
- اتوآنالایزر (بیمارستان نمازی)
-
- رادیوایمنواسی) شرکت تابشیار نور(
۲-۳- گروه های آزمایشی
-
- در این گروه تمام مراحل جراحی و آزمایش مطابق با پروتکل آزمایش انجام گرفت، ولی شریانهای کلیه طی آزمایش بسته نمیشد. این گروه به مدت هفت روز قبل از جراحی یک میلیلیتر آب مقطر را از طریق گاواژ دریافت کردند. (گروه Sham).
-
- در این گروه نیز تمام مراحل جراحی و آزمایش مطابق با پروتکل آزمایش انجام گرفت، ولی شریانهای کلیه طی آزمایش بسته نمیشد. این گروه به مدت هفت روز قبل از جراحی، بربرین mg/kg/day) 15( در یک میلیلیتر آب مقطر را از طریق گاواژ دریافت کردند. (گروه Sham+BBR).
-
- رتهایی که پس از جراحی، شریانهای کلیوی آنها به مدت ۴۵ دقیقه کلمپ و سپس باز گردیدند و ۲۴ ساعت ریپرفیوژن انجام شد. این گروه به مدت هفت روز قبل از جراحی آب مقطر را از طریق گاواژ دریافت کردند. (گروه I/R) .
-
- در این گروه تمام شرایط همانند گروهI/R بود، با این تفاوت که مدت هفت روز قبل از جراحی بربرینmg/kg/day) 15 (در یک میلیلیتر آب مقطر ]۲۴ [از طریق گاواژ دریافت کردند. (گروهI/R+BBR ).
۲-۴- روش آماده سازی حیوانات
رت ها با تزریق داخل صفاقی کتامین و زایلازین به میزان به ترتیب ۶۰ و ۵ میلیگرم به ازای هر کیلوگرم وزن بدن بیهوش میشدند. بعد از ثابت کردن حیوان بیهوش شده بر روی میز جراحی نواحی شکم تراشیده و تمیز گردید. در تمام مراحل آزمایش درجه حرارت بدن حیوان توسط یک ترمومتر مقعدی اندازه گیری میشد و با بهره گرفتن از لامپ هایی که در زیر و روی میز جراحی قرار داشتند درجه حرارت بدن حیوان در محدودهcͦ ۱±۳۷ حفظ می شد. در مرحله بعد با ایجاد یک برش طولی بر روی شکم و باز کردن آن، اطراف عروق کلیوی کاملاً تمیز شده و شریان و ورید کلیه در زیر استریومیکروسکوپ جراحی با دقت از یک دیگر جدا شدند سپس با قرار دادن کلمپهای غیر آسیب رسان به دور شریانهای کلیوی به مدت ۴۵ دقیقه هر دو شریان مسدود شدند. پس از اتمام جراحی و قرار دادن احشاء در داخل شکم یک گاز آغشته به نرمال سیلین جهت جلوگیری از خشک شدن احشاء روی شکم قرار داده میشد. بعد از برداشتن کلمپها و حصول اطمینان از برقراری مجدد خونرسانی کلیه ها، ناحیه شکم به کمک بخیه بسته شد. تمامی مراحل جراحی به صورت استریل انجام گرفت و به منظور جلوگیری از بروز عفونت ۴۰۰۰۰ واحد پروکایین پنی سیلین و ۵۰ میلیگرم استرپتومایسین به صورت داخل عضلانی بعد از اتمام جراحی به حیوانات تزریق گردید.