اندازه گیری ph
Ml100 آب مقطربه ۱۰ گرم نمونه خمیر ماهی از هر تیمار و شاهد اضافه شد و به مدت ۱۰ ثانیه با میله شیشه ای مخلوط شد . سپس pH نمونه ها با pHمتر دیجیتالی اندازه گیری شد. قبل از اندازه گیری pHنمونه ها دستگاه pHمتر با استاندارد های ۴,۷ و۱۱ کالیبره شد (۹) .
۳-۳-۳
اندازه گیری TVN
برای اندازه گیری میزان کل بازهای نیتروژنی فرار (TVB-N) 10 گرم از نمونه خمیر ماهی ۲ گرم اکسید منیزیم (کاتالیزور) ،۲ قطره ضد کف و ۳۰۰ میلی لیتر آب مقطر به بالن کلدال اضافه شد. درون ارلن ۲۵ میلی لیتر اسید بوریک ۲ درصد و ۲ قطره متیل رد ریخته شد و در زمانی که حجم بالن به CC 100 رسید با اسید سولفوریک ۱/. نرمال تیتر گردید. و مطابق فرمول ذیل میزان TVB-N محاسبه گردید(۶۳).

۳-۳-۴
اندازه گیریTBA
برای اندازه گیری تیوباربیتوریک اسید، ۲۰۰ میلی گرم از نمونه خکیر ماهی به یک بالن ۲۵ میلی لیتر انتقال داده شد و با ۱-بوتانول به حجم رسانده شد و ۵میلی لیتر از این مخلوط را در لوله­ی درب­دار منتقل گشت و ۵ میلی لیتر به آن معرف تیوباربیتویک اسید اضافه گردید. لوله های فوق به مدت ۲ ساعت در حمام آب °C95 قرار گرفتند. سپس در دمای محیط سرد شدند و مقدار جذ ب نوری آن در ۵۳۰ نانومتر به وسیله دستگاه اسپکتروفتومتر اسپکتروفتومتر Uvvisible seconam مدل xtb5 در مقابل آب مقطر خوانده شد و مطابق فرمول ذیل تیوباربیتوریک اسید محاسبه گردید(۶۴)
۳-۳-۵
استخراج چربی از خمیر ماهی
استخراج چربی با روش کلروفرم-متانول انجام شد (۶۵)‌ ابتدا مقدار ۱۵ گرم نمونه خمیر ماهی را وزن شد و به همراه ۶۰ سی سی متانول در دکانتور ریخته و به خوبی یکنواخت گردید. سپس مقدار CC 30 کلروفرم افزوده و دکانتور تکان داده می شود. پس از ۵ دقیقه دوباره ۳۰ میلی لیتر کلروفرم به دکانتور اضافه شده و به مدت ۲۴ ساعت در این حالت قرار گرفت تا چربی استخراج شود. بعد از ۲۴ ساعت برای جداسازی فازها ۳۶ میلی لیتر آب مقطر اضافه شد. بعد از ۲ ساعت فاز زیرین در بالن سرسمباده ای جمع شده و در روتاری قرار گرفت تا حلال آن تبخیر شود و فقط روغن باقی بماند. روغن استخراج شده برای اندازه گیری FFA و PV مورد استفاده قرار گرفت.
۳-۳-۶- انداره گیری مقدار پراکسید
نمونه روغن استخراج شده به دقت در یک ارلن مایر ml250 وزن گردید و حدود ml25 از محلول اسید استیک کلروفرم با نسبت ۲:۳ به محتویات ارلن اضافه گردید .سپس ml5/0 از محلول یدور پتاسیم اشباع ml30 آب مقطر و ml5/0 محلول نشاسته ۱٪ به محتویات ارلن اضافه شد . مقدار ید آزاد شده با محلول تیوسولفات سدیم ۰۱/۰ نرمال تیتر گردید و با توجه به معادله ذیل میزان پراکسید محاسبه شد(۶۴) .
۳-۳-۷ اندازه گیری اسید های چرب آزاد
۲۵ میلی لیتر الکل اتیلیک خنثی شده به وسیله سود نرمال به نمونه روغن اضافه گردید. سپس در مراحل بعدی با کمک ۲ تا ۳ قطره معرف فنل فتالئین و میزان مصرفی سود نرمال مقدار اسیدیته برحسب درصد اسید اولئیک بر طبق فرمول ذیل تعیین گردید (۶۴)‌
.
۳-۳-۸ آنالیز اسیدهای چرب :برای تعیین پروفایل اسید های چرب از روش J.V.O fallen JRBاستفاده شد. در این روش برای تهیه محلول استاندارد g 0125/0 از پودر استاندارد وزن کرده و در یک بالن ژوژه ml 25 با متانول به حجم میرسانیم .
در یک لوله آزمایش سرپیچ دار مقدار g 5/0 از نمونه را وزن کرده و به ترتیب موراد زیر را به آن اضافه می کنیم cc 1محلول استاندارد–ml7/0 هیدروکسید پتاسیم ۱۰ نرمال –۳/۵ میلی لیتر متانول خالص
درب لوله رابسته و به مدت ۵/۱ ساعت در حمام آب گرم ۵۵ درجه سانتی گراد قرار می دهیم و هر۱۵ دقیقه آنرا با شیکر به مدت ۵ ثانیه هم می زنیم .در ادامه به آن ml 58/0 اسید سولفوریک ۲۴ نرمال اضافه کرده . رسوب سفید رنگی تشکیل میشود – گاز لوله ها راخارج کرده و به مدت ۵/۱ ساعت در حمام ۵۵ درجه سانتی گراد می گذاریم . سپس به لوله ها هگزان اضافه می کنیم وبه مدت ۲ دقیقه ورتکس می کنیم و به مدت ۲۰ دقیقه در محلی ثابت می گذاریم به آن na2so4 اضافه کرده و فاز رویی را جدا کرده به لوله تمیز منتقل می کنیم و با سرنگ هامیلتون به اندازه ۱ مایکرولیتر به دستگاه GC مدل varian cp-3800 تزریق می کنیم (۶۶) مشخصات ستون و برنامه حرارتی دستگاه به شرح ذیل می باشد : مشخصات ستون : cp-sill 88far FAME 50m*0.25 mm *0.2 µm برنامه حرارتی دستگاه :